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激光共聚焦顯微鏡的基本原理及應用等相關知識的探討

  激光共聚焦顯微鏡的基本原理及應用等相關知識的探討
  激光共聚焦顯微鏡作為一種微觀形態(tài)學工具,激光共聚焦顯微鏡是80年代發(fā)展起來的一項劃時代意義的高科技新產(chǎn)品,它是在熒光顯微鏡成像基礎上加裝了激光掃描裝置,利用計算機進行圖象處理,使用紫外或可見光激發(fā)熒光探針,從而得到細胞或組織內(nèi)部微細結(jié)構(gòu)的熒光圖象,激光共聚焦顯微鏡在亞細胞水平上觀察例如Ca2+,pH值,膜電位等生理信號及細胞形態(tài)的變化,成為形態(tài)學,分子細胞生物學,神經(jīng)科學,藥理學,遺傳學等領域中新一代強有力的研究工具。
  激光共聚焦顯微鏡基本原理:
  激光共聚焦顯微鏡基本結(jié)構(gòu)比光學顯微鏡要復雜,它除了包括光學顯微鏡部分之外,主要由激光光源、掃描裝置、檢測器、計算機系統(tǒng)(包括數(shù)據(jù)采集,處理,轉(zhuǎn)換、應用軟件)、圖象輸出設備、光學裝置和共聚焦系統(tǒng)(如光學濾片,分光器,共聚焦針孔及相應的控制系統(tǒng))等部分組成。
  傳統(tǒng)的光學顯微鏡使用的是場光源,標本上每一點的圖象都會受到鄰近點的衍射光或散射光的干擾;激光共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點光源對標本內(nèi)焦平面上的每一點掃描,標本上的被照射點,在探測針孔處成像,由探測針孔后的光電倍增管(PMT)或冷電耦器件(cCCD)逐點或逐線接收,迅速在計算機監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖象。照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處成像,激光共聚焦顯微鏡這樣得到的共聚焦圖象是標本的光學橫斷面,克服了普通顯微鏡圖象模糊的缺點。
  激光共聚焦顯微鏡在材料領域應用初探:
  激光共聚焦顯微鏡的發(fā)展在國外,主要為日本。是從80年代末期開始的,目前在日本,激光共聚焦顯微鏡已經(jīng)是一種被廣泛采用的技術(shù),既用來觀察樣品表面亞微米程度(0.12微米)的三維形態(tài)和形貌,又可以測量多種微小的尺寸,諸如體積、面積、晶粒、膜厚、深度、長寬、線粗糙度、面粗糙度等等。
  另外,激光共聚焦顯微鏡還有以下特點:
  1、使用方便,與一般光學相似,且全部采用計算機直觀控制。
  2、基本無須制樣,不損傷樣品。不需要做導電處理,也容許大尺寸樣品直接觀察,完全不破壞樣品。
  3、幾十秒到一兩分鐘即完成全部的掃描,成像,測量采樣工作。激光共聚焦顯微鏡目前已經(jīng)用于材料和機械加工方面的研究。